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ELISA实验设置

预实验设置

1、酶联免疫吸附分析(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)是基于抗原和抗体的免疫反应和酶的高效催化反应而建立的一种生物分析技术,可用于对待测样本中目的蛋白进行定性、定量分析。常见的待测样本为血清、血浆。

2、对于一个完整的 ELISA kits,内包含所有试剂,其相应的实验操作直接参考说明书即可。对于第一次接触 ELISA实验而言,预实验是一个不错的选择;而对于待测样本而言,预实验可以实现样本的初步判断,比如样本是否需要稀释等。

3、那么如何做好预实验呢?

3.1 首先需按说明书制备好样本;若说明书没提及,则需查找相应的样本处理方法;

3.2 所有用到的试剂要按说明书要求配制或准备,预实验一般设置2条带(16孔),操作步骤请参考说明书,酶标板具体设置如下:


CSB-E04505m Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF ELISA Kit 为例,标准品OD值如下:


待测样本为脑组织K1、M1(为随机编号),选择不同的稀释倍数做预实验,其相应的OD如下:

通过标准品的OD及浓度值,运用Curve  Expert 1.4 软件,绘制标准曲线,如下:

(具体绘制过程请参考//technical_con_3275.html)

将不同稀释倍数的样本OD代入公式,即可得到相应的待测样本的浓度。(对于有稀释倍数的,需要乘以相应的稀释倍数)。

选择使待测样本浓度处于曲线陡峭处,针对CSB-E04505m检测脑组织,可考虑原液检测。

4、预实验确定样本合适的稀释倍数,下面进行正式实验,排版如下,注意做好标识,正式实验操作步骤请参考相应的说明书。

(注意:竞争法的稍有不同,需严格按照说明书操作)